rhTPO下游纯化工艺主要是去除细胞培养过程CHO-HCP,CHO-HC-DNA,CHO-HC-RNA,内毒素,培养基组分及未糖基化的rhTPO等。
rhTPO制备工艺流程:
细胞培养(CHO)——固液分离(离心)——收集上清夜——澄清(MF等)——UF/DF(2-8℃,10KDa ,TFF,30-50倍)——AEX初步纯化(DEAE Seplife FF)——中度纯化HIC(Butyl Seplife FF)——精细纯化SEC(Seplife S-200)——UF/DF(2-8℃,10KDa ,TFF,调整浓度置换缓冲液)——除菌过滤(0.22um直压过滤)——制剂化
注:高度糖基化的rhTPO在CIT 和 ITP质粒中有良好的效果,若制备工艺中,糖基化rhTPO中混有非糖基化的rhTPO,可以运用亲和层析Boricacid Seplife 4FF(软胶)及Boricacid Seplife LXPM 5504(硬胶)进行糖基化rhTPO的特异性吸附纯化。
rhTPO纯化常用填料
AEX:DEAE Seplife FF用于rhTPO的初步纯化,从培养液中快速分离出目标物质,减少体积,去除大部分的杂质及可能存在的蛋白酶。
HIC:Butyl Seplife FF去除离子交换层析后原液中残留的HCP等杂质。
SEC:Seplife S-200去除rhTPO制备过程降解片段及聚集体,未糖基化组分等痕量杂质。
AC:Boricacid Seplife 4FF,特异性的结合糖基化rhTPO,分离高度糖基化rhTPO中未糖基化的组分。
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