GMP论坛-中国最大的GMP认证信息交流平台

搜索
查看: 507|回复: 1

新冠灭活疫苗下游工艺解决方案

[复制链接]
  • TA的每日心情
    开心
    5 小时前
  • 140

    主题

    185

    帖子

    6154

    积分

    传播制药技术,促进医药合规, 确保药品安全!

    Rank: 9Rank: 9Rank: 9

    QQ达人论坛元老优秀版主突出贡献论坛达人

    发表于 2022-4-8 16:15:06 | 显示全部楼层 |阅读模式
    新冠灭活疫苗
    病毒灭活疫苗是最为成熟的疫苗生产技术,也是最传统的经典技术路线:即在体外培养新冠病毒,然后将其灭活,使之没有毒性,但这些病毒的“尸体”仍能刺激人体产生抗体,使免疫细胞记住病毒的模样。新冠病毒灭活疫苗生产流程主要包括:临床样品获取——稳定毒株细胞培养——病毒收获及澄清——病毒灭活——纯化——无菌处理——制剂——灌装,如图1。
    面对新冠病毒变异株,国内灭活疫苗已经开展了单价、Delta + Omicron 两价还有原型株+Delta + Omicron三价疫苗的研发工作,基本完全了临床前研究并且已经进行了生产验证。
    微信图片_20220408160832.png
    图1:新冠病毒灭活疫苗生产过程(来源:网络)

    新冠灭活疫苗生产工艺过程
    1.细胞培养:新冠病毒及其变异株用Vero扩增。Vero细胞是贴壁依赖性型细胞,采用微载体反应器大规模培养,兼具悬浮培养和贴壁培养的优点,且容易放大。细胞可贴附微球 2D 表面生长,1g的 Seplife LX-MC-Dex1微载体提供 4400 cm2的表面积给细胞贴附。
    微信图片_20220408161045.png
    图2:蓝晓科技细胞培养微载体用于Vero细胞培养细胞生长情况观察(新冠灭活疫苗生产中投入使用)
    2.病毒扩增(略)
    3.细胞收集:细胞接种病毒后,细胞90%以上出现细胞病变效应(CPE),而对照组正常时,用离心的方式收集细胞。
    4.细胞破碎:可以采用负20摄氏度反复冻融等方式破碎细胞,让细胞内的病毒释放出来。
    5.收获病毒:细胞破碎后,用离心的方式收获病毒上清液。
    6.灭活:加入5-30mg/L的β-丙内酯(BPL)在37度下处理2-24h。
    7.澄清:离心收集的病毒溶液后加入一定量的核酸酶处理30-60min后用微滤膜组件进行澄清处理。
    8.纯化:
    8.1.高倍浓缩加一步凝胶过滤层析纯化:澄清后的病毒用300KD的超滤膜组件,超滤伴随洗滤的方式浓缩30-50倍,并去除大量的水及培养基中组分,去除部分HCP。浓缩后用凝胶过滤层析介质Seplife 4FF一步层析纯化,一步层析即可去除大于99%的HCP及大于99%的BSA,如图4.
    微信图片_20220408161203.png
    图3:蓝晓科技Seplife 4FF纯化新冠灭活病毒色谱图
    微信图片_20220408161210.png
    图4:蓝晓科技Seplife 4FF填料纯化新冠灭活疫苗结果

    8.2.多模式层析加凝胶过滤两步层析:澄清的病毒溶液先用多模式层析Seplife Suncore 700 流穿模式纯化,去除大量的HCP和BSA,流穿的病毒溶液再次加入核酸酶处理2h左右,进一步的降解残留的核酸,处理后再用凝胶过滤层析Seplife 4FF纯化,因第一步多模层析是已去除了大量的杂质,第二步凝胶过滤层析时只有少量杂质,凝胶过滤时可适当的加大上样量。
    微信图片_20220408161401.png
    图5:蓝晓科技多模式层析介质纯化病毒原理示意图
    8.3离子交换加凝胶过滤两步层析:澄清的病毒溶液先用Q  Large Scale 离子交换填料吸附洗脱模式纯化,病毒和BSA结合在填料上,HCP等杂质流穿,洗脱时用不同的洗脱强度分别洗脱下来病毒和BSA,洗脱液在经凝胶过滤层析Seplife 4FF或者多模式层析Seplife Suncore 700流穿模式精细纯化即可。
    9.调整病毒粒子浓度及置换缓冲液:用超滤伴随洗滤的方式调整病毒粒子浓度及置换缓冲液。
    10.除菌过滤:用0.22um的滤芯除菌过滤。
    11.制剂化(略)。
    第二新冠灭活疫苗Delta + Omicron 两价还有原型株+Delta + Omicron三价疫苗等灭活疫苗,单个毒株灭活按上面的工艺制备,后面再以一定比例混合后制剂化,即可实现多价灭活疫苗。





  • TA的每日心情
    开心
    2022-5-16 10:51
  • 3

    主题

    32

    帖子

    123

    积分

    Rank: 7Rank: 7Rank: 7Rank: 7

    QQ达人

    发表于 2022-4-9 10:21:13 | 显示全部楼层
    好东西!
    回复

    使用道具 举报

    您需要登录后才可以回帖 登录 | 立即注册

    本版积分规则

    Copyright © 2001-2013 Comsenz Inc.Powered by Discuz!X3.4
    手机触屏版小黑屋GMP论坛
    快速回复 返回顶部 返回列表